平板菌落計數(shù)法是如何使用公式計算的？
更新時間：2024-03-15 文章更新于2024-03-15 點擊次數(shù)：5430次
平板菌落計數(shù)法，是種統(tǒng)計物品含菌數(shù)的有效方法。方法如下:將待測樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋之后,其中的微生物充分分散成單個細胞，取-定量的稀釋樣液涂布到平板上,經(jīng)過培養(yǎng),每個單細胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落,即一個單菌落應(yīng)代表原樣品中的一一個單細胞;統(tǒng)計菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。
平板菌落計數(shù)法公式為每毫升中菌落形成單位(cfu)=同一稀釋度三次重復(fù)的平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)×5。
一般選擇每個平板上長有30~300個菌落的稀釋度計算每毫升的含菌量較為合適。同一稀釋度的三個重復(fù)對照的菌落數(shù)不應(yīng)相差很大，否則表示試驗不精確。實際工作中同一稀釋度重復(fù)對照平板不能少于三個，這樣便于數(shù)據(jù)統(tǒng)計，減少誤差。由10-4、10-5、10-6三個稀釋度計算出的每毫升菌液中菌落形成單位數(shù)也不應(yīng)相差太大。平板菌落計數(shù)法，所選擇倒平板的稀釋度是很重要的。一般以三個連續(xù)稀釋度中的二個稀釋度倒平板培養(yǎng)后所出現(xiàn)的平均菌落數(shù)在50個左右為好，否則要適當(dāng)增加或減少稀釋度加以調(diào)整。
平板菌落計數(shù)法使用的培養(yǎng)基為結(jié)晶紫中性膽鹽瓊脂培養(yǎng)基，簡稱VRBA。無論是國標(biāo)，還是培養(yǎng)基的使用說明中都明確表示，VRBA是不需要進行滅菌的，煮沸2min即可使用。特別指出這一點是因為很多朋友都在問VRBA的滅菌條件，對不滅菌的培養(yǎng)基不信任，害怕出現(xiàn)檢測異常，那是因為這些小伙伴們對其中的原理不清楚。
大腸菌群的定義是在一定培養(yǎng)條件下能夠在發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌，因此大腸菌群是不能形成芽孢的，在VRBA培養(yǎng)基煮沸的過程中，即使有大腸菌群存在也會被殺滅，所以從培養(yǎng)基帶入污染的可能性是沒有的。當(dāng)然盛裝培養(yǎng)基的容器是需要進行滅菌的，以免容器引入污染。
另外，VRBA是一種選擇性的培養(yǎng)基，含有的結(jié)晶紫對革蘭氏陽性菌有比較強的抑制作用而對革蘭氏陰性菌幾乎沒有作用，而且平板培養(yǎng)產(chǎn)生的菌落還需要進行復(fù)發(fā)酵的驗證，因此VRBA培養(yǎng)基就不需要進行滅菌了。但值得注意的是，VRBA需要現(xiàn)配現(xiàn)用，配制出的培養(yǎng)基應(yīng)當(dāng)在3h之內(nèi)使用完畢。
