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浮游植物鑒定中葉綠素a的常規(guī)測(cè)定方法
更新時(shí)間：2018-10-16 文章更新于2018-10-16 點(diǎn)擊次數(shù)：2118次
在浮游植物鑒定中，測(cè)出的葉綠素a的含量是表征浮游植物生物量的重要指標(biāo)之一。通過(guò)測(cè)定浮游植物葉綠素，可掌握水體初級(jí)生產(chǎn)力情況，反映水體富營(yíng)化程度。通常對(duì)淡水中葉綠素a的測(cè)定方法是采用《水和廢水監(jiān)測(cè)分析方法（第四版）》，即下面所用的規(guī)范方法。該方法實(shí)驗(yàn)提取過(guò)程操作略顯繁瑣，樣品在分析過(guò)程中多次轉(zhuǎn)移，易造成樣品的缺失，影響浮游植物鑒定結(jié)果。在不影響丙酮萃取分光光度法原理的前提下，利用丙酮加熱以提高萃取能力，并對(duì)若干個(gè)湖泊、湖庫(kù)、河流水進(jìn)行了對(duì)比實(shí)驗(yàn)。
在改進(jìn)的方法中，將步驟2的樣品提取，從“取出干燥后的濾膜放入研缽，加入少量碳酸鎂粉末和2~3mL90%丙酮，充分研磨提取葉綠素a。用離心機(jī)4000r/min離心20min。將上清液轉(zhuǎn)入10mL比色管，用90%丙酮定容為10mL，搖勻。”改成“將干燥后的濾膜放入10mL具塞比色管中，加入少量的碳酸鎂粉末，再加入90%丙酮10mL，旋緊管塞，于50℃恒溫水浴鍋中萃取5min。充分搖勻后，放入4℃冰箱在黑暗中浸漬提取5h。”
通過(guò)兩個(gè)方法得出的結(jié)論可看出，規(guī)范法操作步驟略顯繁瑣，在樣品的研磨過(guò)程中，本來(lái)含量就低的樣品極易損失，不易收集。丙酮易揮發(fā)的特性，又使得研磨不能持久太久，造成規(guī)范法的測(cè)定結(jié)果偏低。改進(jìn)法利用丙酮加熱提升了丙酮的萃取能力，延長(zhǎng)浸漬時(shí)間，促進(jìn)藻類(lèi)細(xì)胞破裂，使更多的葉綠素a從細(xì)胞中釋放出來(lái)。在整個(gè)過(guò)程中，提取物始終保持在密閉的比色管中，保持了定容的體積，確保了葉綠素a濃度的可靠性。實(shí)驗(yàn)證明，采用丙酮加熱、延長(zhǎng)提取時(shí)間的方法可以提高對(duì)葉綠素a的提取，簡(jiǎn)便易操作的特點(diǎn)更適用于大批樣品的數(shù)據(jù)監(jiān)測(cè)。
在改進(jìn)的方法中，將步驟2的樣品提取，從“取出干燥后的濾膜放入研缽，加入少量碳酸鎂粉末和2~3mL90%丙酮，充分研磨提取葉綠素a。用離心機(jī)4000r/min離心20min。將上清液轉(zhuǎn)入10mL比色管，用90%丙酮定容為10mL，搖勻。”改成“將干燥后的濾膜放入10mL具塞比色管中，加入少量的碳酸鎂粉末，再加入90%丙酮10mL，旋緊管塞，于50℃恒溫水浴鍋中萃取5min。充分搖勻后，放入4℃冰箱在黑暗中浸漬提取5h。”
通過(guò)兩個(gè)方法得出的結(jié)論可看出，規(guī)范法操作步驟略顯繁瑣，在樣品的研磨過(guò)程中，本來(lái)含量就低的樣品極易損失，不易收集。丙酮易揮發(fā)的特性，又使得研磨不能持久太久，造成規(guī)范法的測(cè)定結(jié)果偏低。改進(jìn)法利用丙酮加熱提升了丙酮的萃取能力，延長(zhǎng)浸漬時(shí)間，促進(jìn)藻類(lèi)細(xì)胞破裂，使更多的葉綠素a從細(xì)胞中釋放出來(lái)。在整個(gè)過(guò)程中，提取物始終保持在密閉的比色管中，保持了定容的體積，確保了葉綠素a濃度的可靠性。實(shí)驗(yàn)證明，采用丙酮加熱、延長(zhǎng)提取時(shí)間的方法可以提高對(duì)葉綠素a的提取，簡(jiǎn)便易操作的特點(diǎn)更適用于大批樣品的數(shù)據(jù)監(jiān)測(cè)。
