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平板菌落計(jì)數(shù)法的操作步驟分析
更新時(shí)間：2023-05-31 文章更新于2023-05-31 點(diǎn)擊次數(shù)：3198次
全自動(dòng)菌落計(jì)數(shù)儀是由計(jì)數(shù)池、計(jì)數(shù)筆、計(jì)數(shù)器及數(shù)碼顯示器等組成。本儀器操作方便、計(jì)數(shù)準(zhǔn)確，可減輕實(shí)驗(yàn)人員的勞動(dòng)強(qiáng)度，提高工效，提高工作質(zhì)量。該儀器廣泛用于食品、飲料、藥品、飲用水、生活污水、工業(yè)廢水、臨床標(biāo)本中細(xì)菌數(shù)的檢驗(yàn)。
平板菌落計(jì)數(shù)法是將等測(cè)樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋后，其中的微生物充分分散為單個(gè)細(xì)胞，取一定量的稀釋液接種到平板上，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)，由每個(gè)單細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖而形成的肉眼可見(jiàn)的菌落，即一個(gè)單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個(gè)單細(xì)胞。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。平板菌落計(jì)數(shù)法的具體操作步驟分析如下：
1、編號(hào)
取無(wú)菌平皿9套，分別標(biāo)明為10-4、10-5、10-6各三套，另取6支無(wú)菌試管分別標(biāo)記為10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
2、稀釋
用1mL無(wú)菌吸管吸取1mL已充分混勻的大腸桿菌菌懸液，地放0.5mL至10-1的試管中，此即為10倍稀釋，將多余的菌液放回原菌液中。
將10-1試管充分振蕩、混勻。另取一支1ml吸管插入10-1試管中來(lái)回吹吸菌液三次，進(jìn)一步將菌體分散、混勻。動(dòng)作不要太猛太快，吸時(shí)插入，吹時(shí)提出，再用此吸管吸取10-1菌液1mL，地放0.5mL至10-2試管中，此即為100倍稀釋，依次類推。
3、取樣
用三支1ml無(wú)菌吸定分別吸取10-4、10-5、10-6的稀釋菌懸液各1mL，對(duì)號(hào)放入編好號(hào)的無(wú)菌平皿中，每個(gè)平皿放0.2mL。
4、倒平板
盡快向上述盛有不同稀釋菌液的平皿中倒入融化后冷卻至45度的LB培養(yǎng)基約15-20ml，置水平位置迅速旋動(dòng)平皿，使培養(yǎng)基與菌液混合均勻。
5、培養(yǎng)
倒置于37度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)。
6、計(jì)數(shù)
算出同一稀釋度三個(gè)平板上的菌落平均數(shù)，并按下列公式進(jìn)行計(jì)算； 每毫升中菌落形成單位（cfu）= 同一稀釋度三次重復(fù)的平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)×5
平板菌落計(jì)數(shù)法是將等測(cè)樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋后，其中的微生物充分分散為單個(gè)細(xì)胞，取一定量的稀釋液接種到平板上，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)，由每個(gè)單細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖而形成的肉眼可見(jiàn)的菌落，即一個(gè)單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個(gè)單細(xì)胞。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。平板菌落計(jì)數(shù)法的具體操作步驟分析如下：
1、編號(hào)
取無(wú)菌平皿9套，分別標(biāo)明為10-4、10-5、10-6各三套，另取6支無(wú)菌試管分別標(biāo)記為10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
2、稀釋
用1mL無(wú)菌吸管吸取1mL已充分混勻的大腸桿菌菌懸液，地放0.5mL至10-1的試管中，此即為10倍稀釋，將多余的菌液放回原菌液中。
將10-1試管充分振蕩、混勻。另取一支1ml吸管插入10-1試管中來(lái)回吹吸菌液三次，進(jìn)一步將菌體分散、混勻。動(dòng)作不要太猛太快，吸時(shí)插入，吹時(shí)提出，再用此吸管吸取10-1菌液1mL，地放0.5mL至10-2試管中，此即為100倍稀釋，依次類推。
3、取樣
用三支1ml無(wú)菌吸定分別吸取10-4、10-5、10-6的稀釋菌懸液各1mL，對(duì)號(hào)放入編好號(hào)的無(wú)菌平皿中，每個(gè)平皿放0.2mL。
4、倒平板
盡快向上述盛有不同稀釋菌液的平皿中倒入融化后冷卻至45度的LB培養(yǎng)基約15-20ml，置水平位置迅速旋動(dòng)平皿，使培養(yǎng)基與菌液混合均勻。
5、培養(yǎng)
倒置于37度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)。
6、計(jì)數(shù)
算出同一稀釋度三個(gè)平板上的菌落平均數(shù)，并按下列公式進(jìn)行計(jì)算； 每毫升中菌落形成單位（cfu）= 同一稀釋度三次重復(fù)的平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)×5
